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3D打印磷酸鈣陶瓷孔隙架構與骨誘導性的關聯及優化策略

時間:2025-05-09 13:49 來源:EFL生物3D打印與生物制造 作者:admin 閱讀:

        在骨修復領域,理想的骨替代物應具備個性化外形與可調節內部多孔結構,以滿足精準醫療需求。3D打印技術的發展為制備復雜結構的骨替代物帶來可能,其中數字光處理(DLP)打印技術具有成型效率高、精度高和表面質量好等優勢,適用于制備多孔磷酸鈣(CaP)陶瓷。CaP生物陶瓷因良好的生物相容性和生物活性,在骨科領域應用廣泛。然而,目前3D打印CaP陶瓷的骨誘導性與傳統發泡法制備的陶瓷相比存在較大差距,這限制了其在骨再生中的應用。盡管已有多種增強3D打印CaP生物陶瓷成骨能力的嘗試,如摻雜、加載藥物和添加生長因子等,但這些方法存在改變底物成分、潛在危害健康和成本高昂等問題。  
       四川大學國家生物醫學材料工程技術研究中心張興棟院士、朱向東研究員、李向鋒副研究員團隊,通過優化孔隙架構來提升3D打印CaP陶瓷的骨誘導性。團隊制備了具有六方密堆積(HCP)球形孔結構的CaP陶瓷,并構建了八面體、菱形和螺旋形結構作為對照。研究系統地探究了不同孔隙架構對陶瓷的結構、力學性能、滲透性以及細胞行為和體內骨誘導性的影響。相關工作以“3D printing calcium phosphate ceramics with high osteoinductivity through pore architecture optimization”為題發表在《Acta Biomaterialia》上。

 

不同孔隙結構的雙相磷酸鈣(BCP)陶瓷成骨活性示意圖。


研究內容
1. 通過設計八面體、菱形、螺旋形和六方密堆積(HCP)四種孔隙結構的模型,使用DLP打印技術制備磷酸鈣(CaP)陶瓷,利用立體顯微鏡、掃描電鏡、X射線衍射儀和壓汞儀等進行表征分析,研究了不同孔隙結構CaP陶瓷的微觀和宏觀結構、相組成、孔隙特征。結果表明,成功制備出具有特定孔隙結構的CaP陶瓷,其相組成包含HA和β -TCP ,不同結構的陶瓷在孔隙率、孔徑等方面存在差異,且均有豐富微孔,晶粒尺寸相似。

圖1. 具有八面體、菱形、螺旋形和六方密堆積結構的BCP生物陶瓷的頂部和側面3D視圖、光學照片、SEM圖像、XRD圖譜、孔徑分布和孔數量分布。  


2. 運用有限元分析和數值流體流動分析方法,結合萬能材料試驗機測試,研究不同孔隙結構CaP陶瓷的力學性能和滲透率。結果顯示,HCP結構的CaP陶瓷壓縮強度和彈性模量最高,應力分布更均勻;其流體流速和滲透率在四種結構中最低,螺旋形結構的滲透率最高。同時,孔隙幾何結構對陶瓷燒結收縮率影響較小,八面體、螺旋形和HCP結構的比表面積無顯著差異,菱形結構比表面積較低。

圖2. BCP生物陶瓷的壓縮強度測試觀察、壓縮載荷下孔隙單元的應力分布、模型內模擬流線、模型橫截面的速度分布、壓縮強度、彈性模量和實際滲透率分析。  


3. 采用體外細胞培養實驗,借助共聚焦激光掃描顯微鏡觀察細胞生長和增殖,進行CCK-8實驗檢測細胞增殖,計算細胞層平均厚度,研究不同孔隙結構對MC3T3-E1細胞行為的影響。結果表明,細胞在各樣本孔壁均能黏附和鋪展,HCP結構組細胞生長均勻并形成圓環,雖然四組細胞增殖無顯著差異,但HCP組細胞層平均厚度最大。

圖3. MC3T3-E1細胞的死活染色和F-肌動蛋白的CLSM觀察、高斯曲率、細胞生長輪廓、CCK-8結果以及細胞層平均厚度。  


4. 對在不同孔隙結構CaP陶瓷上培養7天的MC3T3-E1細胞進行ALP染色,對培養14天的細胞進行OCN和BMP-2免疫熒光染色,采用實時定量逆轉錄PCR分析細胞培養7天和14天時相關成骨基因的表達,研究不同孔隙結構CaP陶瓷對細胞骨向分化的影響。結果顯示,HCP組的ALP活性相對較高,能顯著促進BMP-2和OCN的高水平表達,且在成骨基因(Col-I、Runx-2、Osx、Ocn和Alp)表達上表現更優。

圖4. MC3T3-E1細胞在不同孔隙結構CaP陶瓷上培養的ALP染色、OCN和BMP-2免疫熒光染色、成骨基因表達以及OCN和BMP-2的平均光密度(MOD)值。  


5. 將不同孔隙結構的CaP陶瓷植入犬肌肉內,在6周和10周后取材進行H&E染色、μ -CT掃描重建,研究不同孔隙結構CaP陶瓷的體內骨誘導性。結果表明,HCP結構組新骨形成最多,植入10周后新骨面積占比最高,骨體積分數(BV/TV)變化百分比最大,其骨誘導性在四組中最強。

圖5. 犬肌肉內植入6周和10周后多孔BCP陶瓷的H&E染色、μ -CT重建3D可視化、骨發生率、新骨面積和BV/TV百分比變化。  


6. 在犬肌肉內植入實驗中,對植入6周和10周后的不同孔隙結構CaP陶瓷進行免疫熒光染色(CD31、α -SMA)和免疫組化染色(OCN),并分析相關蛋白表達的平均光密度(MOD)值,研究其體內血管生成和骨誘導相關蛋白的表達情況。結果表明,所有組的CaP陶瓷都能促進CD31和α -SMA的表達,HCP組在術后6周時CD31表達最高,10周時α -SMA表達顯著高于部分組;同時,HCP組的OCN陽性表達明顯更高。

圖6. 犬肌肉內植入6周和10周后,八面體、菱形、螺旋形和HCP結構的CD31和α -SMA免疫熒光染色、OCN免疫組化染色以及CD31、α -SMA和OCN的MOD值。  


7. 建立兔股骨髁臨界尺寸缺損模型,植入不同孔隙結構的CaP陶瓷,8周后利用μ -CT重建和組織學染色,研究不同孔隙結構CaP陶瓷的體內骨再生能力。結果表明,HCP結構組與宿主骨整合良好,新骨形成量顯著高于其他組,骨體積分數(BV/TV)、小梁數量(Tb.N)和小梁厚度(Tb.Th)等指標表現更優。

圖7. 植入兔股骨缺損8周后,八面體、菱形、螺旋形和HCP結構的材料與新骨整合的3D重建μ -CT圖像、亞甲基藍和堿性品紅染色、新骨體積與總缺損體積的定量分析、新骨面積、殘余體積與總缺損體積、小梁數量和小梁厚度。


研究結論
本研究系統評估了不同孔隙結構對雙相磷酸鈣(BCP)陶瓷理化和生物學性能的影響。結果顯示,在四種研究結構中,HCP組的抗壓強度最高,滲透率最低。具有球形凹孔結構的HCP組,能夠促進MC3T3-E1細胞的黏附、增殖和骨向分化。與八面體、菱形和螺旋形結構組相比,HCP組在體內表現出更優異的血管生成能力和骨誘導性。通過兔股骨髁缺損修復實驗進一步證實,HCP組具有令人滿意的骨修復能力。這些結果表明,構建具有六方密堆積結構、球形凹面的孔隙結構,是增強3D打印BCP陶瓷力學性能、骨誘導性和骨再生能力的有效途徑。

文章來源:

https://doi.org/10.1016/j.actbio.2024.07.008


 

(責任編輯:admin)

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